In vitro predatory activity of conidia of fungal isolates of the Duddingtonia flagrans on Angiostrongylus vasorum first-stage larvae

INTRODUCTION:Angiostrongylus vasorum is a nematode that parasitizes molluscs, dogs, and even man. METHODS:The objective was to evaluate the predatory activity of the conidia of two fungal isolates of Duddingtonia flagrans (AC001 and CG722) on first-stage larvae (L1) of A. vasorum in laboratory conditions. RESULTS: At the end of the experiment, there were significant reductions (p<0.01) of 74.5% and 63.2%, on average, in the A. vasorum (L1) recovered in the AC001 and CG722 treatment conditions, respectively. CONCLUSIONS: The two isolates of fungi were efficient in the capture and destruction of A. vasorum (L1).

Novos caracteres morfológicos em Sarasinula marginata (Semper, 1885) (Gastropoda: Soleolifera): presença de ductos excretores de células mucosas, circulação fechada e definição populacional de hemócitos com bases nas evidências morfológicas / New morphological characters in Sarasinula marginata (Semper, 1885) (Gastropoda: Soleolifera): presence of excretory ducts of mucous cells, circulation and population definition of hemocytes with bases in morphological evidence

Foram apresentados nesta tese três trabalhos decorrentes de estudos morfológicos em lesmas Sarasinula marginata (Semper, 1885) e S. linguaeformis (Semper, 1885) da família Veronicellidae. Esses trabalhos foram analisados através de técnicas histológicas, utilizando-se várias colorações especiais, além da injeção de nanquim para definição do sistema circulatório e observações em microscopia eletrônica de varredura com vácuo variável (SEM-Leo-VP-435) e varredura confocal a laser (LSM-510-META, Zeiss). Os resultados definiram caracteres que podem contribuir para os estudos da biologia e taxonomia desses gastrópodes terrestres, tais como: eliminação do muco das células glandulares do tegumento através de ductos excretores comuns em S. marginata e S. linguaeformis; ocorrência de circulação totalmente fechada, tanto na via aferente (tipo arterial), como na eferente ou de retorno (tipo venoso), apresentando, além disso, artérias esfincterianas peculiares na camada fibromuscular em S. marginata; e presença de somente uma população de hemócitos circulante na hemolinfa de S. marginata, apresentando dois tipos morfológicos (tipo monocitário e tipo macrofágico), correspondendo provavelmente a etapas diferentes de maturação e ativação e não a subpopulações diferentes

Novos caracteres morfológicos em Sarasinula marginata (Semper, 1885) (Gastropoda: Soleolifera): presença de ductos excretores de células mucosas, circulação fechada e definição populacional de hemócitos com bases nas evidências morfológicas

Foram apresentados nesta tese três trabalhos decorrentes de estudos morfológicos em lesmas Sarasinula marginata (Semper, 1885) e S. linguaeformis (Semper, 1885) da família Veronicellidae. Esses trabalhos foram analisados através de técnicas histológicas, utilizando-se várias colorações especiais, além da injeção de nanquim para definição do sistema circulatório e observações em microscopia eletrônica de varredura com vácuo variável (SEM-Leo-VP-435) e varredura confocal a laser (LSM-510-META, Zeiss). Os resultados definiram caracteres que podem contribuir para os estudos da biologia e taxonomia desses gastrópodes terrestres, tais como: eliminação do muco das células glandulares do tegumento através de ductos excretores comuns em S. marginata e S. linguaeformis; ocorrência de circulação totalmente fechada, tanto na via aferente (tipo arterial), como na eferente ou de retorno (tipo venoso), apresentando, além disso, artérias esfincterianas peculiares na camada fibromuscular em S. marginata; e presença de somente uma população de hemócitos circulante na hemolinfa de S. marginata, apresentando dois tipos morfológicos (tipo monocitário e tipo macrofágico), correspondendo provavelmente a etapas diferentes de maturação e ativação e não a subpopulações diferentes

Angiostrongylus costaricensis, A. cantonensis e A. vasorum: diferenciação, detecção no hospedeiro intermediário e filogenia utilizando a PCR-RFLP, Multiplex PCR e sequenciamento da região espaçadora transcrita interna do DNA ribossomal / Angiostrongylus costaricensis, A. cantonensis and A. vasorum: differentiation, tracing the intermediate host and phylogeny using PCR-RFLP, multiplex PCR and sequencing of internal transcribed spacer of ribosomal DNA

Angiostrongylus costaricensis, A. cantonensis e A. vasorum possuem importância humana e veterinária. O exame dos moluscos infectados com esses parasitos é feito após digestão do molusco e sedimentação das larvas (L3). Essas larvas são inoculadas em roedores para obtenção dos vermes adultos que são identificados morfologicamente. Em decorrência dessas dificuldades, desenvolvemos um método molecular para a detecção de larvas desses parasitos utilizando a técnica de PCR-RFLP com iniciadores direcionados para as regiões conservadas da região espaçadora transcrita interna dois do DNA ribossomal (ITS2 do rDNA nuclear) e citocromo oxidase subunidade I do DNA mitocondrial (COI do DNAmt). A enzima de restrição ClaI foi a que forneceu os resultados mais precisos para a primeira região e a RsaI para a segunda. Para a reconstrução filogenética desses helmintos sequenciamos a região ITS2 do rDNA. As topologias das árvores foram ligeiramente diferentes. Na árvore de máxima parcimônia (MP) foi observada a formação de dois grupos: I) A. costaricensis, II) A. cantonensis e A. vasorum. Nas árvores de agrupamento de vizinhos (NJ) e máxima verossimilhança (ML) também houve a formação de dois grupos: I) A. costaricensis e A. vasorum, II) A. cantonensis. Nas três árvores, o grupo de A. costaricensis foi dividido em dois ramos, separando as populações do Brasil e da Costa Rica, sustentados por alto valor de “bootstrap”. As topologias das árvores e os valores de distância dessas populações sugerem que elas estão se diferenciando, provavelmente, devido à distância geográfica. Os resultados obtidos sugerem a existência de um único gênero: Angiostrongylus. De fato, as espécies A. cantonensis e A. costaricensis consideradas por alguns autores como pertencentes ao gênero Parastrongylus mostraram-se distantes entre si e mais próximas de A. vasorum. A partir das sequências desses nematóides, foram desenhados dois iniciadores. Esses iniciadores associados a um par de iniciador direcionado para a região ITS do hospedeiro intermediário, foram utilizados em uma única reação, denominada multiplex-PCR. Foram obtidos perfis específicos para cada nematóide. O amplicon de ITS2 de A. costaricensis do Brasil foi de 400 pb, de A. costaricensis da Costa Rica 480 pb, de A. cantonensis um fragmento duplo de 480-500 pb e de A. vasorum 450 pb. Com essa mesma metodologia detectou-se A. costaricensis em Sarasinula marginata experimentalmente infectada, sendo obtido um amplicon do parasito de 400 pb, associado ao amplicon do molusco de 1000 pb.

Angiostrongylus costaricensis, A. cantonensis e A. vasorum: Diferenciação, detecção no hospedeiro intermediário e filogenia utilizando a PCR-RFLP, Multiplex PCR e sequenciamento da região espaçadora transcrita interna do DNA ribossomal

Angiostrongylus costaricensis, A. cantonensis e A. vasorum possuem importância humana e veterinária. O exame dos moluscos infectados com esses parasitos é feito após digestão do molusco e sedimentação das larvas (L3). Essas larvas são inoculadas em roedores para obtenção dos vermes adultos que são identificados morfologicamente. Em decorrência dessas dificuldades, desenvolvemos um método molecular para a detecção de larvas desses parasitos utilizando a técnica de PCR-RFLP com iniciadores direcionados para as regiões conservadas da região espaçadora transcrita interna dois do DNA ribossomal (ITS2 do rDNA nuclear) e citocromo oxidase subunidade I do DNA mitocondrial (COI do DNAmt). A enzima de restrição ClaI foi a que forneceu os resultados mais precisos para a primeira região e a RsaI para a segunda. Para a reconstrução filogenética desses helmintos sequenciamos a região ITS2 do rDNA. As topologias das árvores foram ligeiramente diferentes. Na árvore de máxima parcimônia (MP) foi observada a formação de dois grupos: I) A. costaricensis, II) A. cantonensis e A. vasorum. Nas árvores de agrupamento de vizinhos (NJ) e máxima verossimilhança (ML) também houve a formação de dois grupos: I) A. costaricensis e A. vasorum, II) A. cantonensis

Nas três árvores, o grupo de A. costaricensis foi dividido em dois ramos, separando as populações do Brasil e da Costa Rica, sustentados por alto valor de “bootstrap”. As topologias das árvores e os valores de distância dessas populações sugerem que elas estão se diferenciando, provavelmente, devido à distância geográfica. Os resultados obtidos sugerem a existência de um único gênero: Angiostrongylus. De fato, as espécies A. cantonensis e A. costaricensis consideradas por alguns autores como pertencentes ao gênero Parastrongylus mostraram-se distantes entre si e mais próximas de A. vasorum. A partir das sequências desses nematóides, foram desenhados dois iniciadores. Esses iniciadores associados a um par de iniciador direcionado para a região ITS do hospedeiro intermediário, foram utilizados em uma única reação, denominada multiplex-PCR. Foram obtidos perfis específicos para cada nematóide. O amplicon de ITS2 de A. costaricensis do Brasil foi de 400 pb, de A. costaricensis da Costa Rica 480 pb, de A. cantonensis um fragmento duplo de 480-500 pb e de A. vasorum 450 pb. Com essa mesma metodologia detectou-se A. costaricensis em Sarasinula marginata experimentalmente infectada, sendo obtido um amplicon do parasito de 400 pb, associado ao amplicon do molusco de 1000 pb